双缩脲试剂测定蛋白质含量步骤

双缩脲试剂测定蛋白质含量的步骤

双缩脲试剂测定蛋白质含量是一种经典的生物化学方法，该方法基于蛋白质分子中的肽键与铜离子反应形成紫色络合物，其颜色深浅与蛋白质含量成正比。以下是双缩脲试剂测定蛋白质含量的具体步骤：

1. 样品制备：

将待测蛋白质样品用双蒸水或缓冲液稀释至适宜浓度。

取适量稀释后的样品，加入适量的双蒸水或缓冲液，使总体积达到规定值。

2. 试剂准备：

准备A液：称取0.1克硫酸铜（CuSO4）晶体，加入少量双蒸水溶解，然后稀释至100毫升。

准备B液：称取0.1克酒石酸钾钠（Na2C4H4O6·4H2O），加入少量双蒸水溶解，然后稀释至100毫升。

将A液和B液按一定比例混合，制备成双缩脲试剂。

3. 比色测定：

取一份稀释后的样品，加入适量的双缩脲试剂，充分混匀。

将混合液置于比色皿中，用紫外-可见分光光度计在540纳米波长处测定吸光度值。

4. 标准曲线绘制：

准备一系列已知蛋白质浓度的标准溶液，按照上述方法测定吸光度值。

以蛋白质浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。

5. 计算蛋白质含量：

根据待测样品的吸光度值，在标准曲线上查找对应的蛋白质浓度。

计算待测样品的蛋白质含量。

6. 注意事项：

在测定过程中，应保持实验室环境的清洁，避免样品和试剂受到污染。

试剂的配制要准确，以免影响测定结果。

样品和试剂的加入顺序要严格按照操作步骤进行，以保证测定结果的准确性。

通过以上步骤，可以准确地测定蛋白质含量，为蛋白质研究提供重要依据。