pcr扩增链的延伸从哪里开始

18煎饼果子时间:2024-07-03

PCR扩增链的延伸从引物的3'端开始。

聚合酶链反应(PCR)是一种用于在体外扩增特定DNA序列的分子生物学技术。在PCR过程中,链的延伸是一个关键的步骤,它涉及到DNA聚合酶从引物的3'端开始合成新的DNA链。

以下是PCR链延伸过程的具体细节:

1. 引物结合:首先,PCR反应混合物中的DNA模板与两种引物结合。这些引物是短的双链DNA分子,它们与目标DNA序列的互补序列相匹配。引物的一端与模板DNA的3'端结合,另一端则位于模板DNA的5'端。

2. 变性:随后,反应混合物被加热至94-98°C,使得双链DNA模板变性成单链。在这一步骤中,氢键断裂,导致DNA双链分开。

3. 退火:温度降低至50-65°C,使得引物与单链模板DNA重新结合。由于引物的3'端与模板的5'端互补,因此引物会在模板的3'端开始结合。

4. 链延伸:温度进一步降低至72°C,这是DNA聚合酶的最适温度。在这个温度下,DNA聚合酶开始从引物的3'端开始合成新的DNA链。DNA聚合酶识别引物的3'端,并沿着模板链移动,同时添加与模板互补的核苷酸。

5. 合成新链:DNA聚合酶在5'到3'的方向上工作,这意味着新的DNA链是从3'端开始合成的。随着酶沿着模板链移动,新的DNA链会从3'端向5'端延伸。

6. 重复循环:上述步骤(变性、退火、链延伸)会重复进行,每次循环都会使目标DNA序列的拷贝数量翻倍。通常,一个PCR反应会进行25-40个循环,这足以产生数百万到数十亿个目标DNA拷贝。

总之,PCR链的延伸是一个精确的过程,它依赖于DNA聚合酶在引物的3'端开始合成新的DNA链,从而实现对目标DNA序列的扩增。

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